Autor: PAIS,F.S

Orientador: TEIXEIRA, S.M.R

Outros autores: CAMPOS, P C [VOLUNTÁRIO]; DA ROCHA, W D [CNPQ];;

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / BIOLOGIA MOLECULAR

Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Departamento: BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA

Palavras-Chave: TRYPANOSOMA CRUZI - ANTÍGENOS - PROTEÍNA RIBOSSÔMICA

Recentemente descrevemos dois novos antígenos de T. cruzi identificados por imunosseleção de uma biblioteca de cDNA de amastigotas com soro de pacientes chagásicos. Estes antígenos contêm seqüências homólogas a uma proteína de ligação ao RNA de T. brucei e a proteína ribossomal L7a de A. thaliana (respectivamente, TcRBP48 e TcRpL7a). Análise de Northern blot mostrou que mRNAs dee TcRBP48 e TcRpL7a são expressos a níveis similares nas três formas: epimastigota, tripomastigota e amastigota. Para melhor caracterizar a resposta imune de pacientes chagásicos contra esses dois antígenos, ambos os cDNAs foram clonados no vetor pGEX para expressão de proteínaas em fusão com GST ( Glutationa - S - tranferase). A proteína de fusão GST:: TcRBP48 foio purificada de culturas induzidas usando coluna de Glutationa Sepharose. Pools de soros de paciente chagásicose anticorpos anti-GST reconheceram a proteína recombinante de extratos totais e frações purificadas, mas os soros chagásicos não reagiram com GST isolado(controle). Em virtude da presença de seqüências de aminoácidos repetitivos na região N- terminal de TcRpL7a, geramos também proteínas em fusão com GST contendo tanto a porção repetitiva (TcRpL7a Rep) quanto não- repetitiva (TcRpL7a?Rep). A análise da reatividade de GST, GST::TcRoL7a (proteína completa), GST::TcRpL7aRep e GST:: TcRpL7a?Rep por meio de Western blot mostrou que apenas as proteínas de fusão contendo repetições foram reconhecidas pelo pool de soro de pacientes chagásicos. No momento estamos otimizando os protocolos de purificação destes antígenos, afim de utilizá-los em ensaios de ELISA com soro de pacientes isoladamente. Os resultados obtidos até agora sugerem que tanto TcRP48 quanto TcRpL7aRep possam ser utilizados para melhorar a sensibilidade e especificidade de testes sorológicos

Apoio: NIH e CNPQp>