Autor: GOMES, M. T. R.. - PIBIC/CNPQ Orientador: SALAS, C. E. Outros autores: FERREIRA, R. S.; LOPEZ, M. T. P.; MELLO, V. J. Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / BIOQUÍMICA Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Departamento: BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA Palavras-Chave: ERK - MITOGÊNICO - CISTEINO PROTEINASE As proteínas ERK (cinase regulada extracelularmente) participam de várias vias de amplificação do sinal celular que podem culminar com ativação mitogênica. Dados da literatura mostram que, misturas de cisteino proteinases inibem a expressão de proteínas ERK em células alvo, inibindo a via de transdução celular. Em nosso trabalho, demonstramos que uma proteína purificada do látex de C. candamarcensis estimula a expressão de ERK em células L929. Na purificação da proteína foram desenvolvidos três processos cromatográficos utilizando uma coluna de gel filtração (Sephadex G-10) e duas colunas de troca catiônica (CM-Sephadex e MONO-S Sepharose). Para verificação da pureza da amostra e determinação da massa molecular relativa foram feitas eletroforeses em géis SDS-PAGE. A seqüência N-Terminal da proteína foi identificada. A proteína purificada foi também submetida a testes de incorporação de timidina triciada a fim de determinar a atividade mitogênica. Variações na expressão de proteínas ERK de células estimuladas com quantidades diferentes da proteína purificada também foi determinada. Neste último experimento, a detecção de ERK foi realizada com o lisado celular pela técnica de Western Blot com o anticorpo anti-ERK. Os resultados demonstraram que a proteinase de 23 kd estimula incorporação de timidina em células L929 e aumenta a expressão de ERK em células Jurkat e L929. Portanto, foi purificada uma proteína do látex de Carica candamarcensis com atividade mitogênica e estimuladora da via de transdução em linhagens de célula L929 (fibroblasto). Propomos que esta proteína seja parte dos mecanismos de defesa de Caricaceae e que contribua com a regeneração dos tecidos da planta submetidos à injúrias. Apoio: CNPq / FAPEMIG |