Autor: COELHO, S.M. - VOLUNTÁRIO Orientador: RIBEIRO, A. M. Outros autores: COELHO, V.A.A.; CRUZ, J.S.; ARANTES, R.M. Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / BIOQUÍMICA Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Departamento: BIOQUÍMICA Palavras-Chave: TÁLAMO - CULTURA CELULAR O tálamo é uma das regiões cerebrais mais afetadas pela deficiência de tiamina. O estabelecimento de uma preparação in vitro de neurônios do tálamo, que permita se estudar os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento dessas lesões, pode contribuir para o esclarecimento desse processo neurodegenerativo que caracteriza, em seres humanos, a Síndrome de Wernicke. Com o objetivo de proceder posteriores estudos eletrofisiológicos e bioquímicos, no presente trabalho, estabelecemos as condições adequadas para obtenção de cultura primária de neurônios talâmicos. Inicialmente, utilizamos um protocolo que vem sendo empregado, com sucesso, para obtenção de células granulares do cerebelo. No entanto, verificamos que esse método não é eficaz para obtenção de neurônios talâmicos. A seguir, utilizamos o método proposto por Formenti & De Simoni, (2000), mas as células obtidas não foram suficientemente estáveis, quando submetidas à técnica de Patch-Clamp usada nos estudos eletrofisiológicos. Estabelecemos então, após vários procedimentos, algumas modificações para assegurar uma maior estabilidade das células. O tálamo foi primeiramente separado do cérebro, fragmentado e a digestão realizada em meio com tripsina 0,25 mg/mL por 60 min. O tecido foi então dissociado com pipetas Pasteur de diâmetros decrescentes. Após centrifugação, 200 mL das células re-suspensas em 2 mL de meio, são plaqueados em lamínulas. Os diferentes protocolos utilizados foram monitorados através da avaliação por microscopia óptica das células obtidas. As preparações foram coradas por hematoxilina-eosina, azul de toluidina ou imunocitoquímica para PGP 9,5 (Protein Gen Product). Os neurônios do tálamo obtidos nas condições estabelecidas são adequados para os estudos eletrofisiológicos. Apoio: CNPq / FAPEMIG |