Autor: REIS, A.H.O

Orientador: CARVALHO, M. R. S

Outros autores: VAINTRAUB, P M P;; VAINTRAUB, M.T;

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / GENÉTICA

Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Departamento: BIOLOGIA GERAL

Palavras-Chave: SELEÇÃO DO SEXO - AMELOGENINA - PCR QUANTITATIVA

Métodos pré-concepcionais de seleção do sexo são de grande importância para se evitar as doenças ligadas ao cromossomo X. A citometria de fluxo permite a separação dos espermatozóides contendo o cromossomo X daqueles contendo o cromossomo Y, com base na diferença de conteúdo de DNA existente entre essas células. As amostras separadas por este método atingem até 90% de enriquecimento para espermatozóides contendo cromossomos X ou Y. O objetivo desse trabalho foi a padronização de metodologia para a avaliação da eficiência da separação dos espermatozóides conforme o tipo de cromossomo sexual presente. Através de hemi-nested PCR foi amplificado um segmento do intron 1 do gene Amelogenina. O alelo deste gene presente no cromossomo X gera um fragmento amplificado de 330 pb e o alelo presente no cromossomo Y gera um fragmento de 280 pb. Essa diferença é devida a uma deleção que o alelo Y carrega nesse segmento. Isto possibilita a diferenciação das bandas oriundas dos cromossomos X e Y. Através de misturas de DNA homens e mulheres foi possível gerar DNA molde para PCR contendo os cromossomos X:Y nas proporções de 1:1, 3:1, 7:1 e 15:1. Na PCR não-quantitativa, usando estes DNA como molde foi possível verificar que enquanto o rendimento do alelo X se manteve constante, o rendimento do alelo Y decresceu proporcionalmente a quantidade de Y presente na amostra. Dessa forma, estabelecemos um padrão para controle do enriquecimento das amostras de sêmen para espermatozóides contendo o cromossomo X. O próximo passo desse estudo será a padronização da PCR quantitativa.

Apoio: capesp>