Autor: ANDRADE, V.A.

Orientador: ORTEGA, J. M.

Outros autores: ;

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / BIOQUÍMICA

Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Departamento: BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA

Palavras-Chave: FATORES DE TRANSCRIÇÃO - FAMÍLIA TEAD - RT-PCR

As proteínas da família Tead exercem a função de fatores de transcrição através da ligação a DNA mediada pelo domínio TEA. Neste trabalho iniciamos a clonagem de proteínas Tead de hamster pela técnica de PCR utilizando iniciadores desenhados para amplificação de proteínas Tead de camundongos a fim de obtermos a amplificação das proteínas ortólogas de hamster, a partir do cDNA extraído de células CHO em cultura. A obtenção de RNA (kit Trizol) e a preparação de cDNA (kit Superscript II) foram conduzidas conforme os fabricantes. Amplificamos com sucesso o fragmento que compreende a porção N terminal de Tead1 até o final do domínio de ligação a DNA, TEA. Não foi possível amplificar Tead2 a partir de cDNA de hamster utilizando o par de iniciadores específicos para Tead2 de camumdongo. A amplificação de Tead3 apresentou fragmento amplificado com o mesmo tamanho que o obtido para Tead3 de camundongo. A amplificação da Tead4 forneceu a amplificação tanto da região N terminal quanto das regiões codificadoras completas, que foram purificadas em gel e utilizadas em segunda reação de PCR, amplificando-se a região N terminal a partir das bandas contendo o cDNA completo das duas isoformas. (amplificação "nested"), sugerindo que as bandas obtidas são mesmo representantes de Tead4 de hamster. De posse de evidências da presença de cDNA codificador para Tead1, Tead3 e Tead4 a e b em células CHO de hamster, utilizamos a técnica de PCR semi-quantitativo para verificar os níveis relativos de expressão dessas proteínas. Com este trabalho pretendemos validar os dados de expressão gênica e iniciar a investigação sobre a atividade dos domínios da proteínas Tead nas células de hamster por sabermos da alta atividade da proteína Tead em células de hamster.

Apoio: FAPEMIG, CNPqp>