Autor: RACIOPPI-BATISTA, C.

Orientador: SANTORO, M. M.

Outros autores: MARES-GUIA, T.R. [DO/CNPQ]; TURCHETTI-MAIA, A.L. [PIBIC/CNPQ]; MARES-GUIA, M.; SANTORO, M.M.;;

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS / QUÍMICA DE MACROMOLÉCULAS

Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Departamento: BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA

Palavras-Chave: PEPTÍDEO-C - ILHOTAS DE LANGERHANS - CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA PERFORMANCE

Nos últimos anos o transplante de ilhotas de Langerhans humanas vem configurando-se numa alternativa terapêutica revolucionária para o tratamento do diabetes mellitus tipo 1. A avaliação in vitro da viabilidade das ilhotas recém-isoladas do pâncreas do doador é etapa de fundamental importância para o sucesso do procedimento, uma vez que seleciona células ativas na produção e secreção de insulina. O peptídeo-C, um hormônio composto por 31 resíduos de aminoácidos, é secretado juntamente com a insulina em quantidades equimolares pelas células beta do pâncreas. Essa estequiometria de secreção permite a determinação da atividade das ilhotas de Langerhans através da dosagem de insulina ou peptídeo-C. A quantidade de insulina e peptídeo-C secretada por 500 ilhotas de Langerhans humanas isoladas é indetectável pelos métodos espectrofotométricos convencionais. A proposta do presente trabalho consiste na derivatização do peptídeo-C com o 9-fluorenilmetil cloroformato (FMOC-Cl), um cromóforo fluorescente comumente utilizado na análise de aminoácidos, capaz de amplificar o potencial de detecção do peptídeo-C. A reação de derivatização foi realizada em diferentes pHs, temperaturas e tempos de reação, misturando-se 2,92 nmol.L-1 de FMOC-Cl a 4,6 mmol.L-1 de peptídeo-C. O excesso de reagente foi removido por filtração ou extração em fase orgânica e a amostra derivatizada analisada por cromatografia em coluna de HPLC de fase reversa e detecção espectrofluorimétrica. A nova metodologia desenvolvida no presente trabalho permite a detecção de até 2,5 picomoles de peptídeo-C, configurando-se numa excelente solução para a avaliação da função de ilhotas de Langerhans humanas.

Apoio: CNPq, CAPES, PADCT III, FAPEMIG, BIOMM S.A., Diabetes Research Institute.p>