Autor: RIVETTI JR.;A.V.

Orientador: LOBATO, Z.I.P.

Outros autores: PINTO, F.F. [CAPES]; BARBOSA,C.N [CAPES]; NASCIMENTO,E.F.; ROCHA, M.A.;;

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS AGRÁRIAS / MEDICINA VETERINÁRIA PREVENTIVA

Unidade: ESCOLA DE VETERINÁRIA
Departamento: MEDICINA VETERINÁRIA PREVENTIVA

Palavras-Chave: CIRCOVIRUS SUÍNO - TECIDO - REAÇÃO CADEIA POLIMERASE (PCR)

O Circovirus suíno (CVS) é o responsável pela síndrome do definhamento multisistêmico pós-desmame (PMWS), síndrome da dermatite e nefropatia suína, tremor congênito, abortos, mumificação fetal, falhas reprodutivas e aumento da mortalidade pré-desmama. Dois tipos de CVS têm sido identificados e caracterizados, CVS tipo 1 é um agente não patogênico enquanto o CVS tipo 2 tem sido associado com essas diversas síndromes. O presente trabalho teve como objetivo utilizar a técnica PCR-nested para detecção de uma região espécie-específica do CVS-2. A extração das amostras de tecido fresco foi realizada utilizando o padrão fenol-clorofórmio-alcool isoamilíco, de acordo com SanbbrooK et al. (1989), com algumas modificações. Os pares de iniciadores para detecção do circovírus tipo 2(Kim & Chae,2001), localizaram-se no fragmento ORF 2 devido ser este, o que melhor diferencia o CVS-1 do CVS-2. A PCR convencional foi realizada utilizando a seqüência do iniciador senso 5'-CGGATGTTGTAGTCCTGGTCG-3' e antisenso 5'-ACTGTCAAGGCTACCACAGTCA-3', na qual se obteve a amplificação de um fragmento de 481 pares de bases (bp). Para a "nested" PCR, utilizou-se os iniciadores o 5'-GATTGTATGGCGGGAGGAGT-3', e 5'-ATTGACGACTTTGTTCCCCC-3' que amplificaram segmentos de 225 bp. Ambas as reações foram realizadas em aparelho termociclador utilizando as mesmas condições, 35 ciclos, com temperatura de desnaturação de 95o C por 1 minuto anelamento dos iniciadores a 65o C por 1 min e extensão a 72o C por 1 min e extensão final de 72o C por 10 min. Após eletroforese o produto amplificado foi visualizado em gel de agarose a 2% evidenciando uma banda correspondente ao peso molecular dos fragmentos amplificados esperados.

Apoio: CNPqp>