Autor: SILVA, C. M.[PROBIC/FAPEMIG]

Orientador: PRADO, M A M

Outros autores: PRADO, V F; FERREIRA, L T; OLORTEGUI, C C

Linhas de pesquisa no CNPq: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E AGRÁRIAS / BIOQUÍMICA

Unidade: INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Departamento: BIOQUÍMICA - IMUNOLOGIA E FARMACOLOGIA

Palavras-Chave: CED-6 / APOPTOSE / EXPRESSÃO / ANTICORPOS

Apoptose é um processo fundamental da vida dos organismos, sendo essencial para impedir o extravasamento do conteúdo celular, o que causaria necrose nas células vizinhas. Estudos genéticos identificaram, até o presente, seis genes (ced-1, ced-2, ced-5, ced-6, ced-7 e ced-10) envolvidos na eliminação das células apoptóticas. As seqüências de ced-6 em C. elegans, humano e Drosophila mostraram um alto grau de homologia, sugerindo uma função conservada para CED-6. Acredita-se que CED-6 seja uma proteína adaptadora uma vez que apresenta um domínio de ligação a fosfotirosina (PTB) N-terminal e diversos domínios de ligação SH3 na extremidade C-terminal. Nós isolamos um homólogo a CED-6 de rato em uma biblioteca de c-DNA de cérebro. A proteína mostrou-se bastante homóloga às proteínas de C. elegans, humano e Drosophila, sendo altamente conservada no domínio PTB enquanto a região C-terminal mostrou-se menos conservada. Para investigar a localização celular de CED-6, geramos uma quimera com a GFP (green fluorescent protein). Análises de microscopia confocal mostraram que GFP-CED estava dispersa através do citosol mas ausente no núcleo. Nós então expressamos a proteína, em E. coli, para a produção de anticorpos utilizando o vetor de expressão pPROEX-HTA. A proteína recombinante com uma cauda de histidina foi purificada usando o kit HisTrapT (TM) . Anticorpos policlonais foram gerados em coelho com a proteína recombinante. Estes anticorpos serão uma ferramenta poderosa para nos ajudar a entender o atual papel de CED-6 de rato na fagocitose.

Apoio: FAPEMIG / CNPq / PADCT / PRONEX